Методы оплодотворения в протоколах ЭКО

Экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) — метод вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), при котором оплодотворение яйцеклетки сперматозоидом происходит в лабораторных условиях, а не в организме женщины. Само оплодотворение это процесс, при котором объединяются мужской и женский генетические материалы образуя зиготу, которая дает начало новому организму. Одним из важнейших задач является выбор метода оплодотворения. Именно от выбранной стратегии зависит количество правильно оплодотворённых ооцитов и в дальнейшем бластоцист. Врачи-репродуктологи и эмбриологи при выборе отталкиваются от анамнеза пациентов, текущих показателей спермограммы на день пункции и предыдущих программ ЭКО.

Этапы ЭКО

1 этап — мониторинг роста и созревания фолликулов при помощи ультразвуковых и (по показаниям) гормональных исследований.
2 этап — пункция или аспирация фолликулярной жидкости, содержащей зрелые яйцеклетки.
3 этап — эмбриологический. Полученные во время пункции фолликулов яйцеклетки помещают в специальные чашки с питательной средой. Во время эмбриологического этапа культуральные чашки находятся в инкубаторе, где поддерживаются условия, сходные с таковыми в материнском организме (точно такая же температура и содержание углекислого газа, кислорода). После получения яйцеклеток у женщины муж сдает сперму.
4 этап — перенос эмбрионов в полость матки. Перенос эмбрионов проводят специальным атравматичным катетером, не прибегая к расширению цервикального канала, поэтому данная процедура является безболезненной, не требующей обезболивания.

В полость матки рекомендуется переносить 2 эмбриона, так как при переносе большего количества выше вероятность наступления многоплодной беременности.
Для ЭКО отбираются только сперматозоиды, совершающие поступательные движения. Оплодотворение яйцеклеток проводят через 4-6 часов после пункции фолликулов. Только один сперматозоид из десятков тысяч необходим для оплодотворения одной яйцеклетки.

Вся работа в эмбриологической лаборатории максимально воссоздает процессы, проходящие при оплодотворении в женском организме. Классическое ЭКО яркий тому пример. Ооциты после пункции отправляются в инкубатор. Там стабильные температура и влажность, пониженное содержание кислорода и отсутствие света – все как в организме. Чашка со средами, в которой лежат ооциты воссоздает жидкость в фаллопиевых трубах, ведь именно там происходит встреча яйцеклетки и сперматозоидов. Полученный мужской эякулят пропускается через систему градиентов и центрифугируется, имитируя прохождение сперматозоидов через женские половые пути. Таким образом они проходят этап капацитации и становятся готовыми к оплодотворению. Оплодотворение происходит в определённый временной промежуток, зависящий от времени введения триггера. Под микроскопом эмбриолог добавляет к ооцитам отмытую и активно подвижную фракцию сперматозоидов, и чашка убирается в инкубатор. Сперматозоиды устремляются к яйцеклеткам, окруженным кумулюсными клетками. Им все так же необходимо преодолевать сопротивление среды и быть достаточно активными, чтобы проникнуть в клетку. Наконец, самый подвижный, самый «нормальный» сперматозоид проникает в яйцеклетку, далее происходит слияние материнского и отцовского генетических материалов, образование зиготы и, в итоге, зарождается новый организм.

Показания к ЭКО:

• женский трубный фактор бесплодия;
• мужской фактор бесплодия, включая обструктивные и необструктивные причины;
• бесплодие у женщины старше 36-37 лет;
• эндометриоз у женщин старше 35 лет;
• идиопатическое бесплодие, при котором неэффективны традиционные, стандартные методы лечения;
• наличие антиспермальных антител;
• генетические аномалии, при которых применяется генетическое исследование эмбриона (ПГД) в целях уменьшения
• частоты абортов и предотвращения передачи специфических генетических аномалий;
• эндокринное бесплодие, при невозможности достижения беременности с помощью гормонотерапии в течение 6-12 месяцев.

При процедуре ИКСИ (от англ. ICSI – IntraCytoplasmic Sperm Injection, Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида в цитоплазму ооцита) — процесс оплодотворения происходит по-другому. Сперматозоид оплодотворяет яйцеклетку не самостоятельно, а при непосредственном участии эмбриолога, он помогает подготовить половые клетки к встрече друг с другом и оплодотворить. Сперматозоиды проходят все те же этапы обработки и подготовки, что и при классическом ЭКО: система градиентов, отмывка, центрифугирование и т.д. С яйцеклетками тоже нужно провести определенные манипуляции перед процедурой ИКСИ. При пункции фолликулов получают ооцит-кумулюсные комплексы (ОКК) – это яйцеклетки окруженные кумулюсными клетками, которые питают, способствуют дозреванию и стабильному состоянию яйцеклетки. Вот от этих самых кумулюсных клеток очищаются ооциты перед процедурой и процесс называется денудацией.

Для чего это нужно?

Во первых, только после денудирования можно определить зрелая яйцеклетка или нет, так как для оплодотворения подходят только зрелые яйцеклетки;

Во вторых, можно оценить ооцит по многим параметрам, таких, как размер, различные изменения в цитоплазме, например вакуоли, агрегации и грануляции;

В третьих, только «очищенные» клетки можно проколоть в определенном положении, необходимом эмбриологу. После того, как и сперматозоиды и яйцеклетки готовы к оплодотворению, эмбриолог за инвертированным микроскопом с помощью микроманипуляторов и специальных иголок выбирает самый подвижный и морфологически нормальный сперматозоид и вводит его в цитоплазму яйцеклетки.
Если в случае классического ЭКО эмбриолог запускает несколько сотен тысяч сперматозоидов и рассчитывает на естественный отбор, то при ИКСИ ему приходится надеяться только на свой опыт и насмотренность, и выбирать на свой субъективный взгляд самый «красивый» сперматозоид. Все последующие механизмы оплодотворения в клетке идут точно так же, как при ЭКО и на утро эмбриологи видят два пронуклеуса мужской и женский, если оплодотворение прошло правильно.
ИКСИ выполняется под микроскопом с увеличением х 400. Для выполнения процедуры требуется удерживающая пипетка, предназначенная для стабилизации яйцеклетки, и микроинъекционная пипетка для ввода одного сперматозоида. ИКСИ пришла на смену двум ранее использовавшимся лабораторным методикам – PZD (частичное рассечение зоны пеллюцида) и SUZI (инсеминация под зону пеллюцида), поскольку она позволяет достичь гораздо более высокого процента оплодотворения.

Показания для ИКСИ

Показания при мужском факторе бесплодия:

• < 500 000 подвижных сперматозоидов в эякуляте;
• < 1% сперматозоидов нормальной морфологии;
• нарушение подвижности;
• азооспермия; используются сперматозоиды (придатка яичка или яичка), полученные путем хирургического забора, криоконсенсервированные сперматозоиды;
• аномальные акросомы у сперматозоидов;
• антиспермальные антитела;необходимость проведения ПГД;
• предшествующее аномальное оплодотворение или его отсутствие, например, у пациенток с эндометриозом тяжелой степени или бесплодием неясного генеза.

Показания при женском факторе бесплодия:

• слишком мало ооцитов;
• избыточная толщина прозрачной оболочки;
• дисморфизм ооцита;
• аномальная кортикальная реакция.

ЭКО или ИКСИ? Что лучше?

Обе методики созданы для достижения единственного результата -оплодотворения и должны использоваться по показаниям. Абсолютными показаниями для ИКСИ являются мужской фактор (единичные сперматозоиды, значительное снижение параметров эякулята и т.д), отсутствие оплодотворения в предыдущих программах ЭКО, сперматозоиды, полученные хирургическим путем. Поэтому при ответе на вопрос хочется сказать, что самый лучший метод оплодотворения тот, который подходит вам и дает наилучший результат.